GB 12292—90

1 主题内容与适用范围

　　本标准规定了水果、蔬菜汁中游离氨基酸的提取净化及测定方法。

2 测定原理

　　水果、蔬菜汁通过阳离子交换树脂，固定及净化氨基酸。用2mol/L氢氧化铵把氨基酸洗脱后，脱氨浓缩。用氨基酸分析仪测定含量。

3 仪器设备

3.1 氨基酸分析仪或高压液相色谱仪；

3.2 玻璃柱，高20cm，内径2cm；

3.3 捣碎机；

3.4 离心机；

3.5 天平；

3.6 旋转蒸发器。

3.7 真空干燥器。

4 试剂

　　全部试剂均为分析纯，配制试剂均用去离子水。

4.1 阳离子交换树脂，Dowex 50W×4型，100～200目，或其他适宜的树脂。

4.2 盐酸溶液6mol/L，0.1mol/L。

4.3 氢氧化铵溶液2mol/L。

4.4 氢氧化钠溶液3.5mol/L。

4.5 每种氨基酸标准溶液0.0025M。

4.6 仪器分析用的各种缓冲液。

4.7 仪器分析用的茚三酮试剂。

5 试样选取和制备

5.1 液体产品　需充分混匀。

5.2 固体产品　选取有代表性的水果和蔬菜洗净，擦干，剥去或削去果皮，用四分法取样150g左右。

5.3 称样　称取样品100～150g，准确至0.01g，置于捣碎器的玻璃缸内，加入等量的水。

5.4 样品捣碎　将盛样品的玻璃缸装在捣碎机上，在1档速度捣碎1min，取出倒入烧杯中。

5.5 过滤及离心　把已捣碎的样液过滤，吸取10mL 滤液放入离心管中，在4000r/min的转速下离心15min。

5.6 脱果胶　对含果胶丰富的样液需用乙醇处理，准确吸取样液5mL，加入34mL96％乙醇，过滤，用
15mL80％乙醇分三次冲洗滤纸，将滤液在35℃下减压蒸馏。

6 分析步骤

6.1 固定柱的装置　将Dowex 50W×4树脂装入玻璃圆柱中，离上端空出约10cm，用6mol/L盐酸250mL活化树脂，然后用水洗至无氯离子为止（用硝酸银检查，不产生白色沉淀）。调节活塞，使溶液流速为1mL/min。

6.2 固定及洗脱　吸取5mL样液或液体产品，除果胶物的样液则取全部，置玻璃圆柱中，再加5mL水，待液体通过树脂后再加2mol/L氢氧化铵50mL，可分3～4次加完 ，用50mL水洗涤，将加2mol/L氢氧化铵流出的溶液收集在圆底烧瓶内，在减压真空和加热（40～45℃）条件下蒸发至干，用5mL0.1mol/L盐酸溶解。

6.3 脱氨　吸取待测液1mL，加入3.5mol/L氢氧化钠溶液2～3滴，调至pH10～11，放在真空干燥器中减压蒸干。用1mL水洗涤，再抽真空蒸干。这样重复2次，加入pH2.2缓冲液0.5mL和0.1mol/L盐酸0.5mL，使pH达到2.2，再稀释5～10倍后测定。

6.4 测定　用氨基酸分析仪测定氨基酸含量，测定前需做2～3个氨基酸标样，待仪器稳定后再测试样。

7 结果计算

7.1 结果表示 用mg/kg或mg/L。

7.2 计算公式

7.3 允许差

　　水果、蔬菜汁游离氨基酸平行测定的结果，相对相差不得大于5％。